Validering af NucleoCounter SP-100 instrument 007-07 i forhold til producentens referenceinstrument

Ved produktion af sædportioner fra DanAvls KS-stationer skal sædkoncentrationen måles for at kunne beregne, hvor meget sæden kan fortyndes. Til måling af sædkoncentrationen anvendes et instrument kaldet NucleoCounter SP-100. Instrumenternes ensartethed er således essentiel for ensartet arbejde mellem forskellige KS-stationer.

For at sikre, at alle instrumenterne måler ens gennemfører producenten en kontrol af alle solgte instrumenter. Kontrollen gennemføres, ved at der med instrumentet gennemføres sammenlignende målinger med producentens referenceinstrument. Målingerne udføres typisk ved anvendelse af ornesæd, på samme måde som instrumentet skal anvendes i praksis. Producentens referenceinstrument er af samme type NucleoCounter SP-100, som de instrumenter der skal kontrolleres.

Denne afrapportering er en statistisk analyse af kontrolmålingerne gennemført i forbindelse med producentens kontrol af instrument 007-07.

Der er ved kontrollen gennemført koncentrationsbestemmelser af råsæd fra to forskellige ejakulater. Ejakulaterne er fortyndet forskellige grader for at opnå forskellige koncentrationer i målingerne. Idet målingen af koncentrationen bygger på princippet om direkte koncentrationsmåling (antallet af celler tælles), påvirker forskellig fortyndingsgrad i koncentrationsmålingens ikke resultatets gyldighed. Fra hver fortynding af råsæd er udført fire målinger med hvert af instrumenterne, i alt 80 analyser med henholdsvis referenceinstrumentet samt instrument 007-07.

Analysen er gennemført ved at afpipettere mellem 16 og 202 mg råsæd til en prøvekop. Efterfølgende er tilsat 10,0 ml Reagent S-100. Fra hver af fortynderne blev gennemført fire koncentrationsbestemmelser med henholdsvis referenceinstrumentet og instrument 007-07.

Statistisk analyse

Repeterbarheden for hvert af instrumenterne er beregnet ud fra en model, hvor der blev estimeret den tilfældige variation mellem koncentrationsbestemmelserne af hver fortynding. Resultaterne er efterfølgende omregnet til variationskoefficient.

Instrumenterne er sammenlignet ved regressionsanalyse gennemført på log-transformerede data. I modellen er for referenceinstrumentet anvendt gennemsnitlige målinger inden for hver fortynding. Som forklarende variabel er anvendt målingerne med instrument 007-07 og hver fortynding indgik som tilfældig effekt.

Analyserne er gennemført ved anvendelse af SAS (Statistical Analysis System, version 9.2).

Analyserne viste en lille variation i målingerne. Repeterbarheden for målingerne med referenceinstrumentet og instrument 007-07 var henholdsvis 2,6 og 3,3 procent. Resultaterne er sammenligneligt med hvad der tidligere er opnået [1]. Tilfredsstillende variationskoefficient betragtes som en bekræftelse på, at arbejdet med instrumenterne og fortyndingerne har været tilfredsstillende, samt at kassetterne til instrumenterne har været i orden.

Figur 1.	Sammenhæng mellem referenceinstrument og instrument 007-07. Målingerne med referencen er et gennemsnit af fire målinger på samme fortynding af råsæd, mens målingerne med instrument 007-07 er præsentation af rådata. Linien repræsenterer estimeret regressionslinie for sammenhængen mellem de to instrumenter.

Sammenligningen af instrumenterne viste god overensstemmelse mellem målingerne fra de to instrumenter (figur 1). Regressionslinien for sammenhængen er angivet i tabel 1.

Tabel 1.

Resultater for regressionsanalyse mellem reference instrument og instrument 007-07 samt konfidensintervaller for regressionsanalysen.

Reference instrument = Exp(-0,0626) + 1,0097 x (måling med instrument 007-07)
95 pct. konfidensintervaller (nedre - øvre)
Konfidensinterval for skæring med Y-aksen		exp(-0,1709) - exp(0,0457)
Konfidensinterval for hældning		0,993 - 1,026

  

Analysen viser, at der kan forventes en systematisk afvigelse på cirka +1 procent ved anvendelse af instrument 007-07 i forhold til producentens referenceinstrument. Afvigelsen er med 95 procent sandsynlighed ikke større end fra -0,007 til +2,6 procent.

[1]	Hansen, C. (2003): Test af Nucleocounter SP100, MiniTüb SDM5 og Corning 254 til koncentrationsbestemmelse af råsæd. Meddelelse nr. 613, Landsudvalget for Svin.